Восстановление активности эндонуклеазы Serratia marcescens NucSma(H89G) гидроксиламином

Р.Г. Хамидуллина, И.И. Фазлеева, О.А. Гимадутдинов

Казанский (Приволжский) федеральный университет, г. Казань, 420008, Россия

Полный текст PDF

Аннотация

Известно, что гистидин играет важную роль в каталитической активности многих нуклеаз. Выполняя функцию общего основания данных ферментов, он активирует образование гидроксила из молекулы воды, который, в свою очередь, атакуя атом фосфора диэфирной связи, вызывает ее разрыв. Ранее было установлено, что у эндонуклеазы Serratia marcescens замена гистидина на глицин приводит к инактивации этого фермента. В настоящей работе было показано, что гидроксиламин восстанавливает активность мутантного фермента эндонуклеазы Serratia marcescens, у которого гистидин в 89-м положении заменен на глицин.

Ключевые слова: эндонуклеаза, плазмида, гидроксиламин, гистидин, имидазол

Литература

1. Лещинская, И.Б., Беляева М.И., Гильфанова К.З. Сравнительное изучение бактериальных фосфомоно- и фосфодиэстераз, гидролизующих нуклеиновые кислоты и нуклеотиды // Микробиология. – 1968. – Т. 37. – С. 979–983.
2. Гимадутдинов, О.А., Анцилевич Л.М. Синтез внеклеточной эндонуклеазы Serratia marcescens рекомбинантными штаммами Escherichia coli // Биотехнология. – 1993. – № 5. – С. 15–18.
3. Friedhoff P., Gimadutdinow O., Ruter T., Wende W., Urbanke C., Thole H., Pingoud A. A procedure for renaturation and purification of the extracellular Serratia marcescens nuclease from genetically engineered Escherichia coli // Protein Expression Purif. – 1994. – V. 5, No 1. – P. 37–43.
4. Friedhoff P., Gimadutdinow O., Pingoud A. Identification of catalytically relevant amino acids of the extracellular Serratia marcescens endonuclease by alignment-guided mutagenesis // Nucleic Acids Res. – 1994. – V. 22, No 16. – P. 3280–3287.
5. Friedhoff P., Kolmes B., Gimadutdinow O., Wende W., Krause K.L., Pingoud A. Analysis of the mechanism of the Serratia nuclease using site-directed mutagenesis // Nucleic Acids Res. – 1996. – V. 24, No 14. – P. 2632–2639.
6. Venkataraman P., Lamb R.A., Pinto L.H. Chemical rescue of histidine selectivity filter mutants of the M2 ion channel of influenza A virus // J. Biol. Chem. – 2005. – V. 280, No 22. –P. 21463–21472.
7. Peracchi A. How (and why) to revive a dead enzyme: the power of chemical rescue // Curr. Chem. Biol. – 2008. – V. 2, No 1. – P 32–49.
8. Chen W.J., Lai P.J, Lai Y.S., Huang P.T., Lin C.C., Liao T.H. Probing the catalytic mechanism of bovine pancreatic deoxyribonuclease I by chemical rescue // Biochem. Biophys. Res. Commun. – 2007. – V. 352, No 3. – P. 689–696. – doi: 10.1016/j.bbrc.2006.11.078.
9. Midon M., Gimadutdinow O., Meiss G., Friedhoff P., Pingoud A. Chemical rescue of active site mutants of S. pneumoniae surface endonuclease EndA and other nucleases of the HNH family by imidazole // ChemBioChem. – 2012. – V. 13, No 5. – P. 713–721. – doi: 10.1002/cbic.201100775.
10. Meiss G., Gimadutdinow O., Friedhoff P., Pingoud A. Microtiter-plate assay and related assays for nonspecific endonucleases // Methods Mol. Biol. – 2001. – V. 160. – P. 37–48. – doi: 10.1385/1-59259-233-3:037.

Поступила в редакцию

21.12.16

Хамидуллина Раиса Гусмановна, кандидат биологических наук, доцент кафедры генетики

Казанский (Приволжский) федеральный университет

ул. Кремлевская, д. 18, г. Казань, 420008, Россия

Фазлеева Ильмира Ильдаровна, магистр кафедры генетики

Казанский (Приволжский) федеральный университет

ул. Кремлевская, д. 18, г. Казань, 420008, Россия

Гимадутдинов Олег Александрович, кандидат биологических наук, доцент кафедры генетики

Казанский (Приволжский) федеральный университет

ул. Кремлевская, д. 18, г. Казань, 420008, Россия

E-mail: Oleg.Gimadutdinov@kpfu.ru

Для цитирования: Хамидуллина Р.Г., Фазлеева И.И., Гимадутдинов О.А. Восстановление активности эндонуклеазы Serratia marcescens NucSma(H89G) гидроксиламином // Учен. зап. Казан. ун-та. Сер. Естеств. науки. – 2017. – Т. 159, кн. 2. – С. 272–282.

For citation: Khamidullina R.G., Fazleyeva I.I., Gimadutdinow O.A. Reactivation of Serratia marcescens endonuclease NucSma(H89G) by hydroxilamine. Uchenye Zapiski Kazanskogo Universiteta. Seriya Estestvennye Nauki, 2017, vol. 159, no. 2, pp. 272–282. (In Russian)

Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.