Статьи 2013

     Калигин М.С., Плюшкина А.С., Титова А.А., Титова М.А., Гумерова А.А., Киясов А.П.   с-kit и десмин-позитивные клетки в регенерации островков поджелудочной железы при экспериментальном диабете у крыс. Гены и Клетки Том 8, № 3, 2013, с. 113-115

Аннотация

В настоящее время получены данные о том, что C-kit и десмин-позитивные звездчатые клетки поджелудочной железы задействованы в регенерации её эндокринной части. Однако до сих пор очень мало что известно об участии и возможных путях дифференцировки этих клеток в ходе восстановления поджелудочной железы. Поэтому целью исследования стало изучение данных клеточных популяций в динамике при экспериментальном аллоксановом диабете у крыс. Работа была проведена на 33 белых беспородных крысах самцах с экспериментальным диабетом, у которых определяли уровень глюкозы, инсулина и глюкагона в сыворотке крови, а также изучали эскпрессию десмина (маркёр звездчатых клеток), а-гладкомышечного актина (a-SMA, маркёр миофибробластов), С-kit (маркёр коммитирова-ных клеток-предшественниц эндокриноцитов), глюкагона и инсулина (маркёры дифференцированных а- и в-клеток островков Лангерганса) в ткани поджелудочной железы. Уже через сутки экспериментальной гипергликемии нами была обнаружена экспрессия десмина в клетках островков поджелудочной железы, максимальное число позитивных клеток отмечено на третьи сутки. Также через сутки в островках появлялись и C-kit позитивные клетки, которые синтезировали глюкагон и инсулин. Поскольку звездчатые клетки поджелудочной железы способны вырабатывать разнообразные факторы роста и компоненты межклеточного матрикса, мы предполагаем, что они являются важным фактором микроокружения для дифференцировки C-kit-позитивных прогениторных клеток в в-инсулоциты через стадию глюкагон-продуцирующих клеток.

     Газизов И.М., Калигин М.С., Андреева Д.И., Йылмаз Т.С., Гумерова А.А., Киясов А.П. Изменения микроструктуры печени после частичной гепатэктомии у крыс. Гены и клетки. 2013. Т. 8. № 3. С. 101-105.

Аннотация

Высокая способность печени млекопитающих к регенерации является одним из излюбленных примеров «регенеративной медицины». При этом репарация печени не может рассматриваться как обычный процесс гипертрофии органа, а должен иметь определенные закономерные этапы. Знание этих этапов необходимо для правильной интерпретации данных в ходе терапии пациентов с патологией печени, в том числе при клеточной терапии. Однако исследования изменений микроструктуры печени в ходе репаративной регенерации крайне малочисленны. Данная работа проведена с целью оценки этих изменений в ходе репаративного процесса после частичной гепатэктомии у крыс. В ходе эксперимента через 1, 2, 3, 5, 7 сут. после операции оценивали размеры печеночных долек, измеряя межпортальные расстояния, анализировали пролиферацию клеток, участие в регенерации перисинусоидальных клеток, желчных протоков, афферентных и эфферентных сосудов печени, исследуя экспрессию специфических маркеров различных клеточных типов методами иммуногистохимии. Результаты исследования показали, после частичной гепатэктомии изменение микроструктуры печени осуществляется в два этапа: 1) гиперплазия печеночных долек путем пролиферации клеток печени до четвертых суток и 2) деление печеночных долек за счет ветвления желчных протоков, ветвей печеночной артерии, воротной вены и центральных вен с четвертых до седьмых суток.

    Шафигуллина А.К., Трондин А.А., Бурганова Г.Р., Титова А.А., Мавликеев М.О., Шарипова Э.И., Табанакова А.В., Газизов И.М., Калигин М.С., Титова М.А., Ризванов А.А., Гумерова А.А., Киясов А.П. Сравнение различных методов выделения, мечения и трансплантации звёздчатых клеток печени крысы. Гены и клетки. 2013. Т. 8. № 3. С. 147-151.

Аннотация

На сегодняшний день всё больше исследований посвящено изучению роли звёздчатых клеток печени (ЗКП) в регенерации органа. При этом остаются нерешёнными важные методические вопросы, в частности, технология выделения ЗКП, способы мечения выделенных клеток и их наиболее эффективной трансплантации. В ходе данной работы было проведено сравнение двух методов выделения клеток: метод коллагеназно-проназной перфузии печени с последующим разделением клеток в градиенте плотности гистоденза и ассоциированного выделения ЗКП и гепатоцитов методом Сеглена. Также был проведён анализ эффективности различных методов мечения ЗКП: мембранными флуоресцентными метками РКН26 и геном зелёного флуоресцентного белка (GFP), доставляемого в клетки методом электропорации с помощью химического реагента TurboFect или аденовируса. Далее меченые клетки были трансплантированы здоровым крысам двумя методами: в селезёнку и в систему воротной вены. На основании полученных результатов можно заключить, что для выделения ЗКП оптимальным является метод коллагеназно-проназной перфузии печени с последующим разделением клеток в градиенте плотности гистоденза, для мечения клеток — доставка гена GFP аденовирусом, для трансплантации — введение клеток в систему воротной вены.

    Плотников М.В., Максимов А.В., Мавликеев М.О., Газизов И.М., Тамакова В.П., Черепнев Г.В., Шамсутдинова И.И., Гумерова А.А., Киясов А.П. Отдаленные результаты трансплантации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток периферической крови у больных с заболеваниями периферических артерий. Гены и клетки. 2013. Т. 8. № 3. С. 133-136.

Аннотация

Целью нашего исследования было оценить отдаленные результаты применения аутогенных гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) периферической крови у больных с заболеваниями периферических артерий. 30 пациентам с заболеваниями периферических артерий (степень ишемии Иб по Покровскому) была произведена внутримышечная аутотрансплантация ГСК, мобилизованных гранулоцитарным колониестимулирующим фактором. Проводили стандартный тредмил-тест, измеряли лодыжечноплечевой индекс (ЛПИ) в покое и его восстановление после нагрузочной пробы. Исследования проведены на сроках 0, 3, 6, 12 и 60 мес. после трансплантации. Иммуногистохи-мическое исследование мышц пораженных конечностей выполнено до введения ГСК и через 3 мес. после введения. Результаты исследования показали, что трансплантация ГСК приводит к увеличению плотности капиллярной сети на 22,4% (p = 0,0005). После аутотрансплантации значение ЛПИ увеличилось на 18,1% к 6 мес. без тенденции к изменению на сроке 1 год. Через 5 лет отмечены значения ЛПИ, соответствующие исходным. Дистанция безболевой ходьбы (ДБХ) прогрессивно увеличивалась на всех сроках наблюдения, к 5 годам большинство пациентов констатировали отсутствие ограничения дистанции ходьбы. Измерение времени восстановления исходного ЛПИ после выполнения нагрузочного теста отражало положительную динамику функционального состояния конечности в течение 1 года, на сроке 5 лет значения этого показателя свидетельствовали об отсутствии у большинства пациентов ограничения «резерва ходьбы». Пятилетняя выживаемость составила 79%, причины смерти пациентов — острая недостаточность мозгового кровообращения, кардиальная патология (3 случая), рак легкого. Таким образом, трансплантация ГСК позволяет купировать симптомы заболеваний периферических артерий и сохранить конечность в отдаленном периоде. Аутотрансплантацию ГСК ввиду отсутствия нежелательных явлений и осложнений на всех сроках наблюдения, можно считать безопасным методом лечения заболеваний периферических артерий у пациентов со 11б степенью ишемии.

     Андреева Д.И., Газизов И.М., Йылмаз Т.С., Калигин М.С., Гумерова А.А., Киясов А.П. Возможные направления дифференцировки мононуклеаров пуповинной крови человека в регенерирующей печени крыс. Гены и клетки. 2013. Т. 8. № 3. С. 95-100.

Аннотация

Известно, что гемопоэтические стволовые клетки (ГСК) пуповинной крови человека способны дифференцироваться в гепатоциты. Эта способность может быть широко использована в лечении различных заболеваний печени. Однако трансплантация аутогенных стволовых клеток в случае наследственных заболеваний печени весьма ограничена. В таком случае необходима разработка методов генетической модификации, и при этом необходимо выяснить, влияет ли генетическая модификация на свойства ГСК. Белым беспородным крысам-самцам проводили операцию частичной гепатэктомии и интраоперационно внутрисе-лезеночно вводили мононуклеары пуповинной крови человека, трансфицированные геном зелёного флуоресцентного белка (GFP). Парафиновые срезы печени окрашивали с антителами к рецептору фактора стволовых клеток, антигену лейкоцитов человека, а-гладкомышечному актину, усиленному GFP, цитокератину 19, специфическому антигену ге-патоцитов человека, а-фетопротеину. Также было проведено двойное иммуногистохимическое окрашивание для выявления возможности экспрессии в одной клетке рецептора фактора стволовых клеток и десмина, GFP и цитокератина 19. Было показано, что трансплантированные в селезенку мононуклеары пуповинной крови человека, трансфицированные геном gfp, мигрируют в печень крыс после частичной гепатэктомии и приобретают фенотип гепатоцитов, синусоидных клеток и холангиоцитов. При этом не происходит дифференцировка трансплантированных клеток в миофи-бробласты. Гепатобласты и гепатоциты, обнаруженные в печени крыс после трансплантации, экспрессировали специфический антиген гепатоцитов человека и а-фетопротеин, а значит являлись функционально активными клетками.